Citogenetica II
La citogenetica e` lo studio dei fenomeni genetici attraverso l’analisi citologica dei
cromosomi al microscopio.
Ferguson-Smith
By NA
CML, Leucemia Mieloide Cronica
 La CML è stata la prima
malattia neoplastica dell’uomo
in cui una specifica anomalia
del cariotipo, il cromosoma
Philadelphia (Ph), sia stata
associata alla insorgenza della
leucemia.
By NA
CML, Leucemia Mieloide Cronica
Nel 95% dei casi di CML
cromosoma non normale
ABL
ABL/BCR
BCR
BCR/ABL
chr Philadelphia (1961)
Indagini FISH E MOLECOLARI
Traslocazione reciproca braccio lungo
chr.9 e il braccio lungo chr.22:
t(9;22)(q34;q11).
SI FORMANO DUE GENI DI FUSIONE:
- ABL-BCR su DER9 (nessuna proteina prodotta)
- BCR-ABL su Ph (proteina di fusione coinvolta nella proliferazone cellulare)
By NA
FISH nella CML 3 spot
(Ph)
By NA
FISH nella CML colocalizzazione
(Ph)
By NA
FISH nella CML 4 spot
e colocalizzazione
By NA
CML esempi
By NA
CML
esempi
By NA
AML, Leucemia Mieloide Acuta
INVERSIONE inv(16)(p13;q22) (CBFB-MYH11)
By NA
AML, Leucemia Mieloide Acuta
By NA
Traslocazioni complesse in AML
Esempio dell’uso di
librerie totali per
evidenziare
riarrangiamenti
t(8;13;14)
By NA
Leucemia Acuta Promielocitica (APL) geni coinvolti PML-RAR)
La traslocazione
t(15;17)(q22;q21) è associata
clinicamente alla leucemia
acuta promielocitica (APL)
In verde chr17
In rosso chr15
15
By NA
der15
der17 17
Leucemia Acuta Promielocitica (APL)
La FISH permette di trovare
traslocazioni criptiche (quelle
che non si vedono dall’analisi
del cariotipo)
t(15;17)(q22;q21)
By NA
15
der15
der17 17
Linfomi Non Hodgkin
t(8;14)
by GP&NA
By NA
Linfomi Non Hodgkin
TRASLOCAZIONE t(14;18)(q32;q21)
catene pesanti
immunoglobuline
By NA
oncogene
BCL2
Caso I
Paziente 38enne all’inizio della gravidanza decide di ricorrere alla
diagnosi prenatale sotto indicazione del consulente genetico che l’ha
informata dell’aumentato rischio di aneuploidie cromosomiche fetali nelle
madri con età avanzata.
Due precedenti gravidanze dalle quali ha avuto due figli
fenotipicamente normali.
Assenza di aborti spontanei.
traslocazione reciproca t (13;19) nel feto
traslocazione reciproca t (13;19) nel padre
By NA
Procedura
diagnostica
ANALISI
CITOGENETICA:
campione di liquido
amniotico aspirato
con l’amniocentesi;
allestimento del
preparato
citogenetico e
analisi del cariotipo;

traslocazione reciproca
t (13;19) nel feto
By NA
Procedura diagnostica
campione di
sangue periferico di
entrambi i genitori ;
allestimento del
preparato
citogenetico e
analisi del cariotipo;

traslocazione reciproca
t(13;19) nel padre
By NA
Evidenziare i breakpoints mediante la FISH I
13.3
13.4
13.2
13.3
13.2
13.1
12
13.2
13.1
12
13.3
13
12
11.2
12
13
14
12
13.1
13.3
13
12
11.2
12
13
14
12
13.1
21
22
14
21
31
32
33
34
13.2
22
13.3
13.4
31
32
13
der(13)
33
34
19
der(19)
By NA
19
Evidenziare i breakpoints mediante la FISH II
By NA
Evidenziare i breakpoints mediante la FISH III
Dopo aver individuato la regione sul cromosoma 13 e sul 19
presumibilmente coinvolta nella traslocazione, selezionare i
corrispondenti BAC da utilizzare per la FISH.
individuare i BAC che vengono tagliati dal breakpoint; in
questo caso dovrei avere tre segnali: uno sul cromosoma
normale e un segnale su ciascun derivativo.
per abbreviare i tempi si puo’ eseguire una coibridazione
marcando contemporaneamente due o tre sonde di DNA
con diversi fluorocromi.
Cy3
By NA
Cy5
Fluor-X
Evidenziare i breakpoints mediante la FISH IV
BAC13
BAC19
By NA
nome
RP11-172E9
RP11-87H20
RP11-145J3
RP11-64J21
RP11-139H14
RP11-108P5
RP11-278A16
RP11-381L18
RP11-248G5
chr13:38,598,683-38,747,253
chr13:38,024,029-38,141,550
chr13:41,240,023-41,327,380
chr13:41,672,113-41,847,224
chr13:44,443,686-44,624,365
chr13:46,974,966-47,137,411
chr13:47,137,312-47,270,518
chr13:50,312,106-50,353,774
chr13:50,353,675-50,541,365
CTD-3214H19
RP11-84C17
CTD-2553C6
RP11-298C17
CTC-499B15
RP11-19I2
RP11-717K18
CTB-55O6
chr19:7,540,075-7,718,036
chr19:7,777,647-777,8013
chr19:9,804,237-9,998,860
chr19:9,998,865-10,195,739
chr19:11,595,301-11,826,547
chr19:11,643,368-11,816,255
chr19:13,126,136-13,288,691
chr19:13,934,436-14,172,366
Evidenziare i breakpoints mediante la FISH V
RP11-84C17
chr19:7,777,647-777,8013
RP11-298C17
chr19:9,998,865-10,195,739
RP11-19I2
chr19:11,643,368-11,816,255
By NA
Evidenziare i breakpoints mediante la FISH VI
chr19:7,163,629-7,377,296
chr19:6,726,912-6,917,544
By NA
der(13)
chr 19
Il breakpoint sul cromosoma 19 è situato tra la sonda
prossimale RP11-52O9 e la sonda distale RP11-717H11.
der(19)
chr 19
Evidenziare i breakpoints mediante la FISH VII
13.3
13.4
13.2
12
13.1
RP-1152O9
RP11-717H11
13.2
13.1
12
13.3
31
32
33
34
By NA
19
der(19)
13.3
22
13
12
11.2
12
13
14
der(13)
13.2
13.1
12
12
13.1
RP11-717H11
14
21
13.3
13.2
13.3
13.4
RP-1152O9
19
Evidenziare i breakpoints mediante la FISH VIII
BAC13
BAC19
By NA
nome
RP11-172E9
RP11-87H20
RP11-145J3
RP11-64J21
RP11-139H14
RP11-108P5
RP11-278A16
RP11-381L18
RP11-248G5
chr13:38,598,683-38,747,253
chr13:38,024,029-38,141,550
chr13:41,240,023-41,327,380
chr13:41,672,113-41,847,224
chr13:44,443,686-44,624,365
chr13:46,974,966-47,137,411
chr13:47,137,312-47,270,518
chr13:50,312,106-50,353,774
chr13:50,353,675-50,541,365
CTD-3214H19
RP11-84C17
CTD-2553C6
RP11-298C17
CTC-499B15
RP11-19I2
RP11-717K18
CTB-55O6
chr19:7,540,075-7,718,036
chr19:7,777,647-777,8013
chr19:9,804,237-9,998,860
chr19:9,998,865-10,195,739
chr19:11,595,301-11,826,547
chr19:11,643,368-11,816,255
chr19:13,126,136-13,288,691
chr19:13,934,436-14,172,366
Evidenziare i breakpoints mediante la FISH IX
By NA
Evidenziare i breakpoints mediante la FISH X
La
sonda
RP11-976L2
emette fluorescenza sul
cromosoma
13
e
sul
der(13) (freccia rossa).
La sonda RP11-1140C18
emette invece tre segnali :
sul cromosoma 13, sul
der(19) (freccia verde) e
sul
der(13)
(freccia
verde).
By NA
IL BREAKPOINT SUL CROMOSOMA 13 CADE ALL’INTERNO DEL BAC 1140C18
Evidenziare i breakpoints mediante la FISH XI
31
32
33
34
13.3
22
13.3
21
RP11-1140C18
13
12
11.2
12
13
14
13.2
13.1
12
RP11-1140C18 chr13:51,089,334-51,234,672
13
12
11.2
12
13
14
12
13.1
chr13:38,598,683-38,747,253
chr13:38,024,029-38,141,550
chr13:41,240,023-41,327,380
chr13:41,672,113-41,847,224
chr13:44,443,686-44,624,365
chr13:46,974,966-47,137,411
chr13:47,137,312-47,270,518
chr13:50,312,106-50,353,774
chr13:50,353,675-50,541,365
chr13:50,946,792-51,124,030
13.2
nome
RP11-172E9
RP11-87H20
RP11-145J3
RP11-64J21
RP11-139H14
RP11-108P5
RP11-278A16
RP11-381L18
RP11-248G5
RP11-976L2
13.3
13.4
BAC13
RP11-1140C18 14
RP11-976L2 21
22
31
32
33
34
By NA
19
Evidenziare i breakpoints mediante la FISH
Dopo aver individuato la regione sul cromosoma 13 e sul 19
presumibilmente coinvolta nella traslocazione, selezionare i
corrispondenti BAC da utilizzare per la FISH.
individuare i BAC che vengono tagliati dal breakpoint; in questo caso
dovrei avere tre segnali: uno sul cromosoma normale e un segnale su
ciascun derivativo.
per abbreviare i tempi si puo’ eseguire una coibridazione marcando
contemporaneamente due o tre sonde di DNA con diversi fluorocromi.
Cy3
By NA
Cy5
Fluor-X
Evidenziare i breakpoints mediante la FISH
Dopo aver individuato la regione sul cromosoma 13 e sul 19
presumibilmente coinvolta nella traslocazione, selezionare i
corrispondenti BAC da utilizzare per la FISH.
individuare i BAC che vengono tagliati dal breakpoint; in questo caso
dovrei avere tre segnali: uno sul cromosoma normale e un segnale su
ciascun derivativo.
per abbreviare i tempi si puo’ eseguire una coibridazione marcando
contemporaneamente due o tre sonde di DNA con diversi fluorocromi.
Cy3
By NA
Cy5
Fluor-X