Come si studia il DNA
Estrazione DNA
Cellule/tessuti
Incubare a 56°C in presenza di
proteasi, RNA-asi e detergente
Trattare con fenolo/cloroformio
Infine, la fase acquosa contenente il DNA viene trattata
con etanolo per precipitare il DNA
Taglio del DNA: gli enzimi di restrizione,
potenti forbici molecolari
Gli enzimi di restrizione
• Gli enzimi di restrizione (detti anche
endonucleasi di restrizione) si legano al DNA in
corrispondenza di specifiche sequenze e
tagliano un filamento di DNA in un punto e l’altro
filamento in un punto differente, così che si
formano 2 estremità “appiccicose” che
permetteranno il successivo riappaiamento
• EcoRI, uno dei tanti enzimi di restrizione
ottenuto da Escherichia coli
PCR: Polymerase Chain Reaction
Kary Mullis Premio Nobel per la Chimica nel 1993
Polymerase Chain Reaction
The PCR method – a copying machine
for DNA molecules
1) Stampo di DNA
2) Denaturazione a 95°C
3) Aggiunta dei
primer 17-24 bp,
temperatura 5060°C
4) Sintesi di DNA
nuovo: 72°C,
TaqPOL e NTP
Si ripetono
i cicli 30-35
volte
Elettroforesi