Spettroscopie atomiche
• Emissione atomica
• Assorbimento atomico
– I campioni devono essere mineralizzati
Campione
In esame
Conc.
HNO3
Microonde fino a
digestione completa
Emissione atomica
D
Monocromatore
o filtro
Assorbimento atomico
- Bruciatore
- Fornetto
Lente
D
Lampada a catodo cavo
Bruciatore
Fornetto di grafite
Spettroscopie di diffusione della luce
Fotoni E0
Collisione elastica tra il
fotone e la particella
E
E0
L’intensità è dispersa su 4π
Diffusione elastica (Rayleigh)
θ
Fotoni E0
8 4 2
I  I 0 2 4 1  cos 2 
r 


Polarizzabilità

Diffusione di Raman
νvib
Sono attive in Raman le vibrazioni in cui
cambia la polarizzabilità
Transizioni attive in IR che possono mascherare lo
spettro della biomolecola (es. acqua) non sono
attive in Raman
Resonance Raman
• Eccitazione selettiva
• Segnali intensi (stato eccitato
più polarizzabile)
• Informazioni ristrette al
cromoforo e non intera
proteina (es. eme, FAD)
Determinazione colorimetrica di
proteine
• Misura diretta a 280 nm
– Aminoacidi aromatici
• Misura diretta a 205 nm
– Legame peptidico
• Metodi indiretti
–
–
–
–
Biureto
Folin-Lowry
Acido bicinconinico
Bradford (blu Coomassie G-250)
Bradford
Rosso
Blu
Biureto
Complesso Rame-Proteina in
ambiente basico:
540-550 nm
Lowry
1) Reazione del biureto  Formazione di
complessi di Cu(II) e riduzione a Cu(I) da
parte di a.a. aromatici
2) Riduzione di fosfomolibdotungstato
(giallo, reattivo di Folin-Ciocalteau) da
parte di Cu(I)  colore blu